本試劑盒專為小鼠椎間盤纖維環細胞分離與培養設計，提供從組織消化到原代培養的全流程解決方案。通過優化試劑配方與操作流程，可高效獲取高純度、高活力的纖維環細胞，適用于椎間盤退變機制研究、組織工程及再生醫學等領域的體外模型構建。

產品組成

試劑盒包含以下核心組件，所有組件均標注規格（3Tests/10Tests）、儲存條件及有效期：

• 小鼠椎間盤纖維環細胞專用清洗液
  規格：3Tests（250 mL）；10Tests（500 mL×2）
  儲存條件：2-8℃
  有效期：12個月

• 小鼠椎間盤纖維環細胞專用消化液
  規格：3Tests（15 mL）；10Tests（50 mL）
  儲存條件：-5~-20℃
  有效期：12個月

• 小鼠椎間盤纖維環細胞基礎培養基
  規格：3Tests（50 mL）；10Tests（100 mL）
  儲存條件：2-8℃
  有效期：12個月

• 小鼠椎間盤纖維環細胞添加劑
  規格：3Tests（10 mL）；10Tests（20 mL）
  儲存條件：-5~-20℃
  有效期：12個月

• 100 μm細胞濾網
  規格：3Tests（3個）；10Tests（10個）
  儲存條件：常溫
  有效期：36個月

• 70 μm細胞濾網
  規格：3Tests（3個）；10Tests（10個）
  儲存條件：常溫
  有效期：36個月

核心組件功能解析

1. 專用清洗液
   含pH緩沖體系與蛋白酶抑制劑，有效去除血液與雜質，維持細胞表面抗原完整性。

2. 專用消化液
   復合酶配方（含膠原酶與胰蛋白酶），精準降解細胞外基質，最大限度保留細胞活性。

3. 基礎培養基+添加劑
   含胎牛血清、生長因子及抗氧化劑，支持纖維環細胞貼壁生長與增殖。

實驗流程

實驗準備

自備器材：

• EP管架（2個）、手術器械（眼科剪×3、直鑷×1、彎鑷×2、顯微直鑷×1、顯微彎鑷×1、手術刀及刀片）

• 培養皿（6cm/10cm）、T25培養瓶、泡沫解剖板、離心管（2mL/15mL/50mL）

預處理建議：

• 正式實驗前使用1-2只正常小鼠進行解剖模擬訓練，優化操作速度與組織分離精度。

操作步驟

1. 組織獲取與清洗 

• 解剖取小鼠椎間盤組織，置于預冷的清洗液中漂洗3次（每次5分鐘），去除附著的肌肉與脂肪。

2. 消化處理 

• 將組織剪碎至1mm3大小，加入消化液（37℃孵育40-60分鐘），每10分鐘輕柔吹打一次。

3. 過濾與離心 

• 消化液經100μm濾網過濾去除大塊殘渣，收集濾液；再經70μm濾網過濾，得到單細胞懸液。

• 1000rpm離心5分鐘，棄上清，用基礎培養基重懸細胞。

4. 培養與傳代 

• 接種至T25培養瓶，添加含添加劑的培養基，置于37℃、5% CO?培養箱中培養。每2-3天換液，待細胞融合度達80%時傳代。

注意事項

1. 無菌操作 

• 試劑分裝后立即用封口膜密封，避免反復凍融；所有操作需在超凈工作臺完成。

2. 消化控制 

• 過度消化會損傷細胞膜，需通過顯微鏡觀察組織消化狀態（以大部分細胞分散為單個或小團塊為宜）。

3. 細胞活性驗證 

• 建議使用臺盼藍染色檢測細胞活力（>90%為合格）。

常見問題解答

Q1：消化后細胞聚集成團如何處理？
A：可適當延長消化時間，或增加吹打次數，但需避免產生過多泡沫。

Q2：培養基出現沉淀是否正常？
A：基礎培養基含血清成分，低溫儲存可能產生少量沉淀，37℃水浴復溶后不影響使用。

儲存與運輸

• 低溫組件（消化液、添加劑）：干冰運輸，收到后立即存于-20℃。

• 常溫組件（濾網）：避光干燥保存。

• 開封后建議：清洗液與培養基4℃保存并于1個月內用完；消化液與添加劑分裝后-20℃保存，避免反復凍融。

產品優勢
? 專用配方：針對纖維環細胞特性優化，提升分離效率與細胞純度
? 操作便捷：預配試劑減少實驗準備時間，標準流程降低操作誤差
? 穩定可靠：嚴格質控確保批次間一致性，支持大規模實驗需求